N Terminal sekventering protokol

05/04/2011 by admin

Edman nedbrydning--en velkendt proces til at identificere den N-terminale aminosyre til et protein--kræver kløvningen af aminosyre, efterfulgt af identifikation ved hjælp af kromatografi eller elektroforese. Automatiserede processer fremskynde N-terminale sekvensering.

Fakta

Proteiner fremstillet inden for enkelte celler fungerer som hormoner, enzymer og andre vigtige regulatorer. Genetiske mutation resulterer i en unormal protein kunne have alvorlige helbredsmæssige konsekvenser.

Proces

Den N-terminale aminosyre er kløvet af behandling med en af flere reagenser, så hydrolyseret til at danne en separat aminosyre. Tyndtlagskromatografi, HPLC eller elektroforese bestemmer størrelsen af aminosyren, og sammenligner det til en kendt standard størrelse. Den nye N-terminale slutningen af de resterende protein kan ligeledes kløvet til identifikation.

Automation

Anvendt Biosystems ledet udviklingen af automatisering Edman degradation, som binder et oprenset protein til en membran og behandler det med phenylisothiocyanate. Den frie aminosyre injiceres automatisk en HPLC system for identifikation.

Komplikationer

Proteiner forbliver relativt ren og fri for forurenende stoffer at præcist bestemme den N-terminale aminosyre. Edman nedbrydning grænser kræver store proteinmolekyler opsplittet i lille peptid kæder ikke længere 50 aminosyrer.


Relaterede artikler

© 2020 - mosolyorszag.com | Contact us: webmaster# mosolyorszag.com