Forskellen mellem direkte & indirekte ELISA

05/18/2012 by admin

En enzym-forbundet immunosorbent assay (ELISA) indebærer reaktion af en antistof-enzym kompleks med en antigen eller antistof holdt immobile på en fast overflade. På inkubation af konjugeret enzymet med en egnet substrat dannes et produkt. Dannelsen af et produkt hjælper med at opdage tilstedeværelsen af antigen eller antistof og dets mængde giver et mål for mængden af antigen-antistof-reaktion, der opstod. ELISA-testen kan udføres i to former: direkte og indirekte.

Test Format

I direkte ELISA-testen afholdes en primær antistof på væggene i et mikrotiter plade. Når prøven mistænkes for at indeholde antigen er tilføjet, er der en antigen-antistof-reaktion. Næste, en enzym-forbundet sekundær antistof, der er i stand til at reagere med antigenet er tilføjet. Hvis antigenet er til stede i prøven, det binder sig til dette enzym-forbundet antistof. Når en farveløs substrat er tilføjet, hvis en farve udvikler, indikerer det tilstedeværelsen af antigen. I den indirekte ELISA, er antigen afholdt på væggene i mikrotiter plade. Når en prøve, der mistænkes for at indeholde antistoffer er tilføjet, opstår en antigen-antistof reaktion. Næste, en enzym-forbundet sekundær antistof i stand til at reaktion med regionen ubundet af antistoffet er tilføjet. Når den farveløs substrat er tilføjet, fører det til udvikling af farve, hvis den anvendte prøve indeholder antistoffer.

Brugervenlighed test

En bred vifte af mærket sekundære antistoffer er kommercielt tilgængelige. Desuden er det muligt at oprette flere primære antistoffer i en given art og bruge den samme sekundær antistof til påvisning. Dette gør den indirekte ELISA nem at udføre. I den direkte ELISA har de primære antistoffer til at være specielt forberedt til at reagere med den specifikke antigen mistænkes for at være til stede i prøven. Dette gør den direkte ELISA ufordelagtigt i forhold til den indirekte test.

Hurtige test

Direkte ELISA-testen er hurtig i forhold til den indirekte test, fordi den bruger kun et enkelt antistof. Den indirekte ELISA kræver et ekstra trin af inkubationen med et andet antistof under afprøvningsprocedure, der forårsager en forsinkelse i at opnå resultater.

Følsomhed

Direkte ELISA-testen er mindre følsomme end indirekte form af testen, fordi der er langt mindre signal forstærkning. Desuden kan mærkning af det primære antistof med et enzym forringe dens immonoreactivity profil. I tilfælde af indirekte ELISA, den primære antistof er ikke mærket og derfor det bevarer sin immunoreactivity. Desuden har hver primære antistof mange epitoper, der kan binde med sekundær antistof; Dette tillader forstærkning af signal, forbedring af metodens følsomhed. Dog er der en chance for at krydse reaktivitet mellem antigen og den sekundære antistof, fører til en fejl i resultaterne. Der er ingen sådan mulighed i direkte ELISA-metoden.


Relaterede artikler

© 2020 - mosolyorszag.com | Contact us: webmaster# mosolyorszag.com